Зміст
- Розведення проб, висадження та інкубація
- Ручний підрахунок
- Автоматизований підрахунок
- Зробити підрахунок більш складним
Один з класичних способів визначення концентрації мікробів у зразку - це розведення зразка, вирощування мікробів на планшетах і підрахунок колоній. Мікроби, що покриваються, виростають з колонії, що утворює колонію, що складається з однієї або декількох клітин, у видиму колонію, яку можна побачити та підрахувати. Бактерії є найпоширенішим мікробом для оцінки кількості пластин. Кількість колоній використовується для виявлення та підрахунку мікробів у ґрунті, воді та продуктах харчування. Протоколи підрахунку колоній підкреслюють точний та методичний підхід.
Розведення проб, висадження та інкубація
Якщо просто намазати зразок мікробів на плиті з агаром, ви побачите стільки одиниць, що утворюють колонії, що окремі колонії змішатимуться, що робить їх неможливим підрахунок. Щоб вирішити цю проблему, змішайте зразок у рідкому середовищі, візьміть невелику кількість цієї суміші та далі розведіть її. Повторіть цей процес шість-10 разів. Розподіліть остаточне розведення на тарілці з агаром та інкубуйте протягом чотирьох-семи днів, перш ніж підрахувати колонії.
Ручний підрахунок
Основна хитрість підрахунку колоній - підрахувати кожну точку колонії один раз. Один із підходів полягає у встановленні чашки Петрі на тлі сітки та підрахунку колоній у кожній осередку сітки, рухаючись за методичним малюнком через усі комірки. Позначення перелічених колоній на звороті чашки Петрі також може бути корисним підходом. Як правило, вам потрібно буде порахувати хоча б три тарілки; використовуйте лише тарілки, що містять від 30 до 300 колоній, щоб зробити надійні умовиводи, пропонує Microbiology Network, фірма, яка надає консультаційні послуги лабораторіям та виробникам. Пластинки з колоніями, які є занадто численними для підрахунку або мають занадто мало колоній, потрібно пересадити після нового розведення.
Автоматизований підрахунок
Помилка людини додає часу, пов'язаного з підрахунком колоній вручну. Щоб підвищити точність та ефективність, помістіть чашку Петрі в автоматизований прилад для підрахунку колоній. Автоматизовані лічильники колоній роблять зображення страви, відокремлюють колонії від фону, а потім використовують алгоритм для підрахунку колоній на тарілці. Алгоритми можуть мати труднощі з розмежуванням колоній, коли дві або більше колоній торкаються до країв, тому це область постійної розробки програмного забезпечення.
Зробити підрахунок більш складним
Точність обчислення щільності мікробів за підрахунками колоній має деякі обмеження. Колонієутворюючі одиниці можуть представляти собою одну клітинку, ланцюжок клітин або цілу грудку клітин. Припущення полягає в тому, що колонія являє собою одну клітину, тому концентрації, обчислені з кількості колоній, можуть бути низькими. Різні мікроби потребують різних умов росту, і колонії на пластині представляють лише ті мікроби, які процвітають на цьому середовищі росту в тих умовах інкубації. Крім того, підрахунок колоній не реєструє мертві клітини, що важливо враховувати, коли вам потрібна концентрація клітин у вихідній вибірці.