Зміст
- Що таке рекомбінантна ДНК?
- Методи побудови рекомбінантної ДНК
- Клонування та використання рекомбінантних послідовностей ДНК
Що таке рекомбінантна ДНК?
Рекомбінантна ДНК - це послідовність ДНК, яка була штучно створена в лабораторії. ДНК - це шаблонні клітини, які використовуються для отримання білків, що складають живі організми, а розташування азотних основ уздовж ланцюга ДНК визначає, які білки утворюються. Виділяючи шматки ДНК і рекомбінуючи їх з іншими послідовностями, дослідники можуть клонувати ДНК всередині бактерій або інших клітин-господарів і виробляти корисні білки, такі як інсулін. Клонування дозволяє значно простіше вивчити окремі послідовності ДНК, оскільки вона виробляє велику кількість ДНК, яку потім можна модифікувати та проаналізувати.
Методи побудови рекомбінантної ДНК
Трансформація - це процес, за допомогою якого сегмент ДНК вставляється в плазміду - невелике самовідтворюється коло ДНК. ДНК розрізають за допомогою рестрикційних ферментів. Ці ферменти виробляються в бактеріальних клітинах як захисний механізм, і вони націлюються на окремі ділянки молекули ДНК і розрізають її. Рестрикційні ферменти особливо корисні, оскільки створюють «липкі кінці» на сегментах ДНК. Як і липучки, ці липкі кінці дозволяють ДНК легко з'єднуватися з комплементарними сегментами.
Ген, що цікавить, і плазміди піддаються одному і тому ж рестриктазному ферменту. Це створює багато різних молекул. Деякі - плазміди, що містять цікавий ген, деякі - плазміди, що містять інші гени, деякі - це дві плазміди разом. Потім плазміди повторно вводяться в бактеріальні клітини, де вони реплікуються, і затребувана рекомбінантна молекула ДНК ідентифікується за допомогою різних типів аналізу. Наприклад, якщо плазміду розрізають на конкретний ген, вчені можуть шукати клітини, які не експресують цей ген, і таким чином виявити успішну рекомбінацію.
Небактеріальна трансформація - це по суті той самий процес, але використовує небактеріальні клітини як господарів. ДНК можна вводити безпосередньо в ядро клітини-господаря. Дослідники також можуть захищати клітку мікроскопічними частинками металу, які були покриті ДНК.
Трансфекція дуже схожа на трансформацію, але замість плазмід використовують фаги. Фаг - це вірус, який заражає бактерії. І фаги, і плазміди ідеально підходять для цього процесу, оскільки вони швидко розмножуються всередині бактеріальної клітини.
Клонування та використання рекомбінантних послідовностей ДНК
Після того як дослідники виявили конкретні бактеріальні клітини, що містять рекомбінантну послідовність, вони можуть вирощувати ці клітини в культурі та генерувати велику кількість гена. Важко змусити бактеріальні клітини насправді генерувати білок з клітини-господаря людини або тварини, але існують способи налаштування експресії генів, щоб полегшити таке виробництво. Якщо нуклеїновані клітини використовуються як клітини-господарі (як при небактеріальній трансформації), у клітин буде менше проблем з експресією рекомбінантного гена.
Після того, як гени були клоновані у великій кількості, вони можуть бути збережені в бібліотеках ДНК, секвенсовані та вивчені. Рекомбінантна технологія ДНК дозволила зробити багато важливих відкриттів у криміналістиці, вивчення генетичних захворювань, сільського господарства та фармацевтики.