Зміст
Вчені використовують серійні розведення (серія розведень 1:10) для обчислення щільності популяції бактеріальних культур. Коли краплину культури, що містить невелику кількість бактерій, висаджують та інкубують, кожна клітина теоретично буде досить далеко від інших клітин, що сформує свою власну колонію. (Насправді деякі колонії можуть бути нащадками двох сусідніх клітин, але це в рідких культурах рідко, і тому кількість колоній є дуже хорошою оцінкою кількості клітин, спочатку перенесених на тарілку.) Оскільки щільність популяції становить невідомо, для розробки однієї тарілки з відповідною кількістю колоній необхідно використовувати різноманітні розведення.
Серійні розводи
Позначте шість пробірок (кожна з яких містить 9 мл ростової середовища) від 1 до 6. Позначте шість пластин агару від 1 до 6. Використовуйте піпетку та стерильні наконечники піпетки 1 мілілітром (мл) для перенесення 1 мл бактеріальної культури в пробірку. 1.
Добре перемішайте і перенесіть 1 мл з пробірки 1 в пробірку 2 за допомогою піпетки та стерильних 1 мл наконечників.
Повторіть крок 2 для решти пробірок, кожен раз переносячи 1 мл з останньо використаної пробірки в наступну пробірку.
За допомогою піпетки та стерильних 0,1 мл наконечників перенесіть 0,1 мл з пробірки 1 на агарову пластину. Запаліть скляний стрижень у формі Г і використовуйте його для рівномірного розподілу краплі навколо тарілки. Інкубіруйте пластину протягом 48 годин при відповідній температурі для бактерій, що використовуються. У різних типів бактерій є різні оптимальні температури росту. Якщо ви не можете знайти оптимальну температуру росту за допомогою еталонного матеріалу, спробуйте інкубувати пластини при 25 і 37 градусах.
Повторіть крок 4, кожен раз переносячи рідину з іншої пробірки на відповідну тарілку.
Розрахунки населення
Поспостерігайте за шістьма табличками і виберіть ту, що має від 30 до 200 ізольованих колоній.
Помножте кількість колоній на тарілці на 10, щоб обчислити кількість клітин на мл культури з використовуваної пробірки для розведення.
Помножте число зі етапу 2 на 10 ^ (номер пластинки), щоб обчислити кількість клітин на мл вихідної культури. Значення 10 ^ (номер пластини) - коефіцієнт розрідження культури, що використовується для прищеплення цієї пластини.