Зміст
Високопродуктивна рідинна хроматографія (ВЕРХ) - це лабораторна методика, яка використовується для розділення та ідентифікації сполук. Це тип колоночної хроматографії, який спирається на різні полярності сполук у розчині з метою їх розділення. ВЕРХ відрізняється від стандартної колонкової хроматографії тим, що використовує тиск для швидшого витіснення розчину через колонку, а тому дає більш швидкі, а іноді і більш точні результати. Мета полягає в тому, щоб відокремити сполуки в стовпці і дати їм окремо вийти.
Захоплення
Через швидкість ВЕРХ та її залежність від різних полярностей сполук два сполуки з подібною будовою та полярністю можуть вийти з апарату хроматографії одночасно або майже в один і той же час. Це відомо як заспокоєння. Захоплення дозволяє важко визначити, яка саме частина суміші елююється в цей момент.
Адсорбовані сполуки
ВЕРХ зазвичай використовує скляну колонку, наповнену намистинами, виготовленими з різних матеріалів. Суміші, що протікають через колонку, містять хімічні речовини, які з різною міцністю зв'язуються з намистом. Міцність зв’язування, яка залежить від подібності в полярності, визначає, як довго хімічна речовина буде зв'язуватися з намистом до вивільнення. Деякі сполуки зв'язуються настільки сильно, що вони по суті ніколи не виділяються з гранул колонки і ніколи не вимірюються в розчині, що виходить з колони.
Вартість
Типові методи лабораторного поділу передбачають розробку аналізу або методу поділу, а потім здійснення цього аналізу для відділення окремих сполук від розчину. Однак зазвичай це призводить до безлічі рішень, які також повинні пройти процедури, що призводить до експоненціального збільшення складності. Хоча ВЕРХ часто може спростити і пришвидшити цей процес, вартість розробки апарату ВЕРХ може стати величезною. Розробка апарату ВЕРХ, хоча і набагато ефективніше, коштує значно дорожче, ніж розробка інших аналізів для відділення сполук. Це робить його фінансово невигідним для багатьох невеликих приватних лабораторій.
Складність
ВЕРХ використовується не тільки для відділення простих сполук, але також використовується для виділення конкретних білків із клітинної суміші. У цьому випадку намистинки в колонці зазвичай покривають антитілом, специфічним для білка, який потрібно зібрати. Білки зв'язують антитіла, а залишився розчин пропускають через колонку, потім білки вивільняють за допомогою іншого розчину і збирають. Для цього потрібен висококваліфікований фахівець, який слідкує за стовпчиком у будь-який час та переконується, що процес працює точно так, як було заплановано.