Зміст
Рідкий живильний бульйон використовується для культивування бактерій, таких як кишкова паличка. Рецепти цього відвару варіюються залежно від бактеріальних видів і наявності генетичних модифікацій, наприклад, стійкості до антибіотиків. Відвар можна затвердіти, додавши агар, який дає можливість бактеріям утворювати окремі колонії, тоді як у рідкій культурі вони просто диспергуються по всьому об'єму. Це основна, але важлива методика для передових методів, таких як клонування генів або мікробіологічні аналізи. Ця стаття передбачає, що стандартні лабораторні штами Escherichia coli повинні культивуватися на агарових планшетах бульйону Luria (або LB).
Зважують 10 г триптону бактерійного сорту, 5 г екстракту дріжджів, 5 грам хлориду натрію, 15 г агару або агарози та 1 мілілітр 1н гідроксиду натрію. Змішайте їх з об'ємом дистильованої та автоклавної стерильної води до отримання 1 л середовища. Автоклавуйте носій у пляшки або колби, що не закриваються, протягом 25 хвилин. Дайте охолонути приблизно до 50 градусів Цельсія, перш ніж додавати реагенти, які будуть знищені на сильному вогні, наприклад, антибіотики або інші харчові добавки.
Дайте автоклавним носіям охолонути до 50 градусів за Цельсієм і не нижче 45 градусів Цельсія, оскільки агар поміститься в його контейнер перед тим, як його можна залити. Отримайте стерильний посуд Петрі і налийте його достатньо, щоб покрити всю площу поверхні тарілки і принаймні половину її глибини. Уникайте переповнення тарілок і бажано не допускайте контакту агару з верхнім краєм посуду. Дозвольте пластинам затвердіти у стерильному середовищі (наприклад, під кришкою для ламінарного потоку), не закриваючи кришки та кут витяжки.
Просушіть тарілки. Хоча пластини можна використовувати, як тільки вони встановлені, на поверхні агару буде присутня деяка кількість вологи, що запобіжить достатньому прилипанню бактерій. Тому найкраще висушити пластини перед нанесенням будь-яких бактерій, наприклад, залишивши їх сидіти при кімнатній температурі на кілька днів або на півгодини під ламінарним витяжкою або в інкубаторі 37 градусів Цельсія.
Зберігайте тарілки. Висушені тарілки слід укласти догори дном (перевернутими) на кришки і повернути їх до оригінальної упаковки, закрити скотчем і загорнути у фольгу для захисту від світла або у відповідну тару. Завжди записуйте дату приготування на тарілках і уникайте використання, якщо тарілки старше 2 місяців.