Фермент - це білок, який каталізує (збільшує швидкість) хімічних реакцій. Оптимальна температура більшості ферментів або температура, при якій ферменти найкраще полегшують реакції, становить від 35 до 40 градусів Цельсія. Підвищення температури в цьому вікні збільшує швидкість реакції, оскільки вона збуджує молекули і збільшує швидкість, з якою ферменти / реактиви стикаються і реагують на отримання продукту. Однак занадто сильно підвищена температура може денатурировать фермент і не дати йому взагалі працювати.
Визначте оптимальну температуру ферменту, нагрівши реакцію нескінченно малою кількістю та взявши невеликі зразки реакції, щоб визначити, коли настає максимальна швидкість отримання продукту.
Виберіть метод. Визначте, як ви збираєтеся вимірювати концентрацію свого продукту в різних точках експерименту. Наприклад, можна виміряти концентрацію багатьох продуктів, використовуючи спектрофотометр і обчислюючи концентрацію поглинання, або вимірюючи флуоресценцію і обчислюючи концентрацію флуоресценції.
Налаштуйте свій експеримент. Помістіть реактиви та ферменти в невелику ємність з кришкою, наприклад, сцинтиляційний флакон. Почнеться реакція. Помістіть сцинтиляційний флакон у більшу склянку води кімнатної температури. Поставте стакан на нагрівальну плиту. Помістіть термометр всередину склянки. Це дозволяє вимірювати температуру реакції в різних точках.
Взяти зразок реакції на 100 мікролітрів при кімнатній температурі, приблизно 25 градусів Цельсія. Увімкніть нагрівальну плиту. При різних температурах від 30 до 40 градусів Цельсія (30,5, 31, 31,5 тощо) беруть 100 мікролітрових зразків вашої реакції.
Визначте концентрацію свого продукту при кожній температурі. Коли температура підніметься вище 40 градусів Цельсія, ви побачите зниження швидкості, з якою субстрат перетворюється на продукт, оскільки фермент денатурований. Точка, в якій продукт виробляється з максимальною швидкістю, - це точка, в якій температура є його оптимальною.