Зміст
- Краща візуалізація
- Ідентифікація та класифікація
- Виявлення життєздатності
- Ідентифікація клітинних структур
За допомогою мікроскопа мікробіологи вивчають характеристики мікроорганізмів, таких як водорості, найпростіші, бактерії, гриби та віруси. У той час як деякі організми, такі як найпростіші та дріжджові клітини, легко спостерігати за допомогою мокрого кріплення, бактеріальні клітини потребують фарбування. Вченими було розроблено кілька методів, таких як фарбування Грамом, швидке кислотне фарбування та флуоресцентне фарбування для кращої візуалізації бактеріальних клітин та клітинних структур. Використовуючи такі методи фарбування, можна виявити структурні особливості, які допомагають класифікувати бактерії.
Краща візуалізація
Бактеріальних організмів настільки мало, що більшість з них видно лише під мікроскопом зі збільшенням 1000X. Однак саме збільшення розміру не забезпечує достатнього ступеня ясності, тому бактерії повинні бути забарвлені перед спостереженням, щоб забезпечити чіткість, необхідну для візуалізації.
Ідентифікація та класифікація
Фарбування бактерій для розрізнення типів бактерій відоме як диференційне фарбування. Плями по Граму - це одна з таких диференціальних плям, яка розрізняє бактерії за вмістом їх клітинної стінки. У цьому способі бактеріальні клітини реагують на кристалічну фіолетову пляму і набувають фіолетовий колір. Після додавання знебарвлюючого речовини деякі бактеріальні клітини втрачають колір, тоді як інші не роблять. Додаючи пляму сафраніну, знебарвлені клітини забирають пляму червоною, тоді як бактеріальні клітини, які не втратили колір, залишаються фіолетовими. Клітини бактерій, які приймають червоний колір, називаються грамнегативними організмами, а ті, які не приймають забарвлення, класифікуються як грампозитивні організми. Фарбування грамом забезпечує швидкий метод первинної ідентифікації бактерій, що беруть участь у інфекціях. Так само процедура швидкого фарбування кислотою допомагає конкретно визначити організми, що належать до класу бактерій, що називаються мікобактеріями, наприклад, Mycobacterium tuberculosis.
Виявлення життєздатності
У зразках бактеріальної культури часто важливо виявити наявність живих бактеріальних клітин. Методи фарбування, такі як флуоресцентне фарбування, допомагають визначити, життєздатні клітини культури чи ні. Живі бактерії здатні перетворювати пляму 5-ціано-2,3-дитолілу тетразолію хлориду (ЦТК) у барвник, який проявляє червону флуоресценцію. Тому, коли культури, забарвлені CTC, виділяють таку флуоресценцію, це вказує на наявність життєздатних бактерій. Йодид пропію - це пляма, яка діє лише на неживі клітини, які мають пошкоджені мембрани, а тому корисна при виявленні мертвих бактеріальних клітин.
Ідентифікація клітинних структур
Фарбування забезпечує метод чітко візуалізації декількох клітинних структур. Наприклад, метод фарбування паливом дозволяє ідентифікувати ядро в бактеріальних клітинах, тоді як пляма Альберта корисна для візуалізації метахроматичних гранул. Аналогічно, техніка просочення сріблом дозволяє ідентифікувати спірохети. Джгутики легко помітити, коли вони забарвлені плямою Рю. Фарбування малахітовим зеленим допомагає виявити бактеріальні спори.