Зміст
Біохімія вивчає молекули, такі як ДНК, РНК та білки. Блотінг-методи - це те, що вчені використовують для поділу цих типів молекул. У клітинах вони існують у вигляді суміші. Блотінг дозволяє дослідникам знайти один білок серед багатьох, як голка в копиці сіна. Знебарвлення зазвичай проводиться шляхом пускання суміші ДНК, РНК або білка, що протікає через пластинку гелю. Цей гель дозволяє невеликим молекулам рухатися швидше, ніж більші. Потім відокремлені молекули притискаються до мембрани, що сприяє переміщенню молекул з гелю на мембрану. Молекули прилипають до мембрани, але залишаються в тому самому місці, окремо одна від одної, як ніби вони все ще в гелі.
Вестерн-Блот
Вестерн-блоттінг - поширена техніка розділення білків за розміром, але в прямих стовпцях. Ці паралельні колонки дозволяють дослідникам порівнювати кількість білка в різних зразках, які проходять прямо поруч, як боулінг. Наприклад, якби ви протестували вплив різної кількості препарату на ріст клітин, ви б обробляли чотири різні групи клітин різною кількістю препарату. Тоді ви могли розбити клітини відкритими та запустити білки кожної групи в окремі смуги на гелі. Поширення білків таким способом дозволяє побачити, що зростаюча концентрація лікарських засобів робить певний білок.
Північна пляма
Північне блоттінг використовується для виявлення РНК. Клітини можуть бути розбиті, щоб вивільнити свою РНК. РНК з різних типів клітин може бути запущена на окремих гелях на гелі. Гель поширює різні РНК за розміром. Ці акуратні паралельні ряди РНК дозволяють досліднику порівнювати, який тип клітин має кількість, яка РНК. Цей метод дозволяє досліднику визначити, чи мають клітини певного захворювання більше цієї РНК або менше цієї РНК. Північне плямування може виявити, як хвороба працює на рівні виробництва РНК.
Південний Блот
Саузерн-блот - це оригінальна техніка блоттінгу, яка запустила систему називання. Його винайшов Едвін Саузерн. Саузерн-блот використовується для виявлення кількості ДНК у суміші. Так само, як і у білка та РНК, ДНК клітини може вивільнятися, коли ця клітина розбита. Саузерн-блоттінг відокремлює ДНК від різних типів клітин за розміром. ДНК з кожного зразка поширюється на акуратні паралельні смуги. Окремі шматочки ДНК можна виявити за допомогою радіоактивного або флуоресцентного зонда, який призначений для зв'язування лише з цим шматочком ДНК. Енергетичний сигнал від радіоактивного зонда або спалахи світла від флуоресцентного сигналу говорять дослідникам, яка кількість цього фрагмента ДНК знаходиться в кожному зразку.
Інші плями
Три основні методи блоттінгу - західна, північна та південна - були модифіковані різними способами для виявлення дещо різних молекул. Наприклад, західний плям проти південного. виявляє білок і ДНК відповідно. Кожна модифікована методика, як правило, виконується звичайним способом, але використовує інший метод для виявлення молекули, яка розповсюджується на паралельні смуги. Південно-західні плями виявляють молекули білка, приклеєного до ДНК. Північно-західні плями виявляють молекули білка, приклеєного до РНК. Далекозахідні плями виявляють молекули білка, приклеєні до інших білків.