Зміст
Спектрофотометр використовується для визначення концентрації певних сполук, таких як білок, у розчині. Взагалі крізь кюветку, наповнену зразком, світить світло. Вимірюється кількість світла, яке поглинається зразком. Оскільки сполуки поглинають світло в різних спектральних діапазонах, для аналізу необхідно встановити правильну довжину хвилі. Існує чимало способів розрахунку концентрації невідомих зразків за допомогою спектрофотометрії, однак використання еталонних стандартів дає найкращу точність. Крім того, стандарти також вказують на те, що спектрофотометр не працює в роботі або інші проблеми з аналізом.
Обчислення за допомогою прямих рівнянь
Проаналізуйте еталонні стандарти на початку аналізу. Стандарти є відомими концентраціями і використовуються для калібрування обладнання та перевірки точності. Усі зразки повинні входити в робочий діапазон стандартів. Якщо ні, то зразки потрібно буде розбавити або збільшити концентрацію норм.
Складіть діаграму розсіювання або графік лінії зі стандартними показаннями концентрації та поглинання. Концентрація буде на осі у, поглинання на осі x. Наприклад, стандарти - 1 проміле, 2,5 проміле і 5 проміле. Дана поглинальна здатність становила 1 проміле = .25, 2,5 проміле = .5 і 5 проміле = .75.
Відформатуйте рядок тренду, щоб відобразити рівняння на графіку. Рівняння покаже формулу y = mx + b. Наприклад, використовуючи стандарти на кроці 2, рівняння y = .1224x + 0.1531. Більшість ліній тренда перехоплюються на нулі, але це залежить від аналітичного методу та значення R-квадрата.
Проаналізуйте невідомі зразки та запишіть показання поглинання.
Використовуйте рівняння (y = mx + b) для визначення концентрації зразків.
Розуміння рівняння прямої лінії
Нехай "Y" дорівнює концентрації. Саме це і вирішиться.
Нехай "X" дорівнює абсорбції зразка. Це поглинання, виміряне спектрофотометром.
Дозволити "" дорівнювати нахил і "b" дорівнювати y-перехоп. Обидва дані, однак, якщо лінія тренда була примусовою через 0, то "b" буде 0.
Розв’язати для концентрації. Використовуючи приклад на кроці 3, замініть "x" як задану поглинаючу здатність .563. Тому:
y = .1224 (.563) + 0.1531
y (концентрація) = .222011