Зміст
Спектрофотометрія - неоціненний інструмент в хімії та біології. Основна ідея проста: різні речовини краще поглинають світло / електромагнітне випромінювання на одній довжині хвилі, ніж на інших. Ось чому деякі матеріали прозорі, а інші кольорові, наприклад. Коли ви просвічуєте світло заданої довжини хвилі через розчин, чим вища його концентрація, тим більше світла він буде поглинати. Для обчислення концентрації потрібно порівняти свої показання з показаннями для стандартів відомої концентрації. Наведена нижче процедура є досить загальною процедурою, написаною з урахуванням лабораторії викладання хімії, але вона може бути змінена і для інших параметрів.
Як завжди, працюючи в лабораторії, надягайте захисні окуляри, рукавички та пальто з довгими рукавами, щоб забезпечити власну безпеку.
Стисніть гумову колбу, щоб спорожнити її повітря, а потім покладіть її на градуйовану піпетку і дайте лампочці розслабитися, щоб вона всмоктувала воду в піпетку. Далі, вийміть цибулину і закрийте пальцем верх піпетки; це запечатає піпетку, щоб розчин всередині не витік, поки ваш палець не буде видалений. Злегка підніміть край пальця, щоб невеликий розчин витік з піпетки, поки ви не досягнете бажаного обсягу. Попрактикуйтеся з водою та склянкою, щоб відчути, як працює градуйована піпетка. Посилання в розділі "Ресурси" містить відеокліп, який показує вам, як користуватися піпеткою, якщо ви ніколи раніше не працювали з нею.
Позначте 5 пробірок як стандартів 1-5. Позначити їх можна за допомогою малярної стрічки та ручки або за допомогою маркера сухого стирання.
Виберіть п’ять концентрацій для своїх стандартів. Ви хочете, щоб стандартні концентрації були відокремлені одна від одної приблизно за один і той же інтервал - наприклад, 0,1 моляр, 0,2 моляр, 0,3 моляра тощо - і приблизно в такому ж діапазоні, як і очікувані вами невідомі. Наразі використовуйте наступні п'ять концентрацій, але пам’ятайте, що вам потрібно буде змінити їх під час виконання власного експерименту:
Стандарт 1: 0,1 моляр Стандарт 2: 0,2 моляр Стандарт 3: 0,3 моляр Стандарт 4: 0,4 моль Стандарт 5: 0,5 моляр
Далі беруть 1 молярний стандартний розчин і додають наступні кількості в пробірки 1-5. Пам'ятайте, що ці кількості розраховуються, використовуючи перелічені вище концентрації, тому, можливо, вам доведеться змінити їх у міру необхідності під час проведення власного експерименту.
Стандарт 1: 0,8 мілілітрів Стандарт 2: 1,6 мілілітрів Стандарт 3: 2,4 мілілітрів Стандарт 4: 3,2 мілілітра Стандарт 5: 4 мілілітрів
Промийте градуйовану піпетку, після чого перенесіть наступну кількість деіонізованої води:
Стандарт 1: 7,2 мілілітрів Стандарт 2: 6,4 мілілітрів Стандарт 3: 5,6 мілілітрів Стандарт 4: 4,8 мілілітрів Стандарт 5: 4,0 мілілітрів
В основному ідея полягає в тому, щоб довести кількість розчину в кожній пробірці до 8 мілілітрів.
Закрийте кожну із стандартних трубок парафільмом і переверніть їх для змішування.
Позначте ще п’ять пробірок як "Невідомо 1-5". Додайте у кожну таку ж кількість невідомого або тестового розчину, як ви використовували з 1 молярним розчином для стандартів. Іншими словами, невідомий 1 міститиме 0,8 мілілітра досліджуваного розчину та 7,2 мілілітра води, невідомий 2 міститиме 1,6 мілілітра досліджуваного розчину та 6,4 мілілітра води тощо.
Кожну з невідомих закрийте парафільмом і обережно переверніть, щоб перемішати.
Увімкніть спектрофотометр і дайте йому нагрітися. Тривалість необхідного часу залежатиме від моделі та виробника.
Встановіть довжину хвилі на спектрофотометрі. Довжина хвилі буде залежати від типу хімічної речовини у вашому експерименті. Поки що, припустимо, 500 нм, хоча пам’ятайте, що вам потрібно буде змінити це для різних експериментів.
Відкалібруйте свій спектрофотометр. Процедура калібрування залежить від пристрою, який ви використовуєте. Для Spectronic 20, поширеної моделі в навчальних лабораторіях, ви спершу відрегулюєте машину так, щоб вона не читала "0 відсотків T", коли не завантажена кювета, потім відрегулюйте її, щоб вона прочитала "100% T", коли порожня кювета, яка містить деіонізовану завантажується тільки вода. Ці процедури можуть відрізнятися залежно від типу машини, яку ви використовуєте, тому детально ознайомтеся з інструкціями виробників.
Після калібрування машини візьміть стандартну 1 пробірку і вилийте вміст у чисту кювету, поки вони не дотягнуться до лінії заливки. Протріть кювету кімві, щоб видалити будь-які пальці чи інший бруд. Вставте кювету в спектрофотометр і запишіть показник "% T".
Повторіть цю процедуру для всіх 10 зразків. БУДЬ ЛІТИ чистити кювету між зразками, щоб переконатися, що ваші результати максимально точні.
Візьміть результати за своїми стандартами та введіть їх у програму електронних таблиць / графіків, наприклад Excel або OpenOffice.
Використовуючи програму електронних таблиць, розділіть 100 відсотків на кожне із значень "% T" для стандартів, а потім візьміть журнал результату. Цей розрахунок дасть вам поглинання. Якщо ви введете формулу, ваша програма електронних таблиць зробить розрахунок за вас.
Приклад: Якщо% T дорівнює 50,6, формула, яку ви вводите в програму електронних таблиць, буде такою:
журнал (100 / 50,6)
Програма електронних таблиць виконає арифметику.
Зробіть те саме для всіх п'яти невідомих / експериментальних значень.
Графікуйте значення поглинання для всіх п’яти стандартів з концентрацією на осі x та поглинанням по осі y. Використовуючи програму електронних таблиць, покладіть на цей графік лінійне рівняння. Рівняння буде мати вигляд y = mx + b. Більшість програм електронних таблиць матимуть функцію лінійної регресії. Детальну інформацію про використання функції лінійної регресії див. У посібнику користувача для програми електронних таблиць.
Візьміть рівняння найкращого рядка з програми електронних таблиць і розв’яжіть його для y, віднімаючи b з обох сторін і розділяючи обидві сторони на m. Результат виглядатиме наступним чином:
(y - b) / m = x
де b і m - значення, знайдені вашою програмою електронних таблиць.
Перевірте свої значення поглинання на невідомі та виберіть три, які потрапляють приблизно в тому ж діапазоні, що і стандарти. Використовуйте ці три значення поглинання для ваших залишилися розрахунків. Якщо всі п’ять потрапляють у той самий діапазон, що і стандарти, ви можете використовувати замість усіх п'ять, але вам потрібно використовувати як мінімум три.
Підключіть кожне з трьох значень поглинання до рівняння замість y. Пам'ятайте, що ваше рівняння було у такій формі:
(y - b) / m = x
Отже, ви хочете вставити значення рівня поглинання для кожного невідомого в рівняння замість y, а потім обчислити x. Ви можете скористатися програмою електронних таблиць, щоб зробити цей розрахунок за вас і зробити його швидшим. Тепер ви обчислили концентрацію хімічної речовини, що цікавить, у трьох розведених невідомих. Однак для приготування цих невідомих було розведено оригінальний розчин, тому тепер потрібно працювати назад і обчислювати концентрацію вихідного розчину на основі коефіцієнта розведення.
Кожен невідомий зразок, який ви вставили в спектрофотометр, розбавляли різною кількістю. Отже, тепер слід розділити концентрацію, яку ви обчислили, виходячи з поглинання для кожного невідомого зчитування на наступне:
Невідомо 1: Поділити на 0,1 Невідомо 2: Ділити на 0,2 Невідомо 3: Ділити на 0,3 Невідомо 4: Ділити на 0,4 Невідомо 5: Ділити на 0,5
Однак пам’ятайте, що ці показники базуються на припущенні, що ви використовуєте розведення, викладені вище. Не забудьте змінити ці значення, якщо ви розбавили ваші зразки на іншу кількість.
Додайте результати разом і розділіть їх на кількість результатів. Це дасть вам середнє значення. Повідомте це число як свою знахідку щодо концентрації вихідного розчину.