Зміст
Рідка хроматографія з високою ефективністю - це методика лабораторного аналізу суміші. Це ефективний тип хроматографії, який використовує високий тиск, а не просто гравітацію, для просування зразка суміші через колонку. Пробу вводять, потім насос, що містить велику кількість тиску, допомагає переміщати зразок уздовж упакованої колонки, де він розділений на окремі компоненти. Потім це розділення аналізується детектором для отримання результатів.
Сайт для ін'єкцій
Для введення в ВЕРХ зразок необхідно спочатку розчинити в полярному рідкому розчиннику, переважно - з відомими спектрами ВЕРХ, щоб його дані можна було відрізнити від зразків. Рідкий розчин, що містить зразок, поміщається в прилад і направляється в колону. Фактичне розташування місця введення залежить від марки інструментів. У більшості випадків процес ін’єкції автоматизований, але в деяких випадках лаборант повинен ввести зразок за допомогою невеликої голки шприца.
Компонент насоса
Компонент насоса блоку ВЕРХ необхідний, оскільки він забезпечує тиск, який просуває зразок через колонку. Потужність насоса змінюється, але потужний може створювати тиск до 6000 фунтів на дюйм або фунт на квадратний дюйм, який застосовується після введення зразка. Це дозволяє зразку проходити крізь колону швидше та ефективніше, ніж якби пропливати через неї, використовуючи лише силу тяжіння.
Опис стовпця
Підвищена швидкість зразка, пропущеного насосом через колонку, дозволяє використовувати колонки іншого типу, ніж ті, що застосовуються в простій рідинній хроматографії. Пакувальний матеріал у колонці може мати набагато менший розмір частинок, що збільшує площу поверхні і, отже, сприяє взаємодії зразка зі стовпчиком. Більшість стовпців HPLC працюють за допомогою полярності. Зразок розчиняють у полярному розчиннику, а колонку складають здебільшого неполярні вуглеводні. Полярні частини молекули зразка проходять через колонку дуже швидко, оскільки вони в основному взаємодіють з розчинником, тоді як зразки неполярних компонентів затримуються в колоні, утворюючи слабкі взаємодії з компонентами колонки. Тому компоненти зразків виходять з колони в порядку від більшості полярних до більшості неполярних.
Функція детектора
Детектори також змінюються залежно від типу інструменту HPLC, який використовується. Однак більшість функціонує таким же основним способом. Джерело ультрафіолетового світла сяє на відокремлених компонентах зразка, коли вони відходять від колони. Більшість органічних сполук поглинають певну кількість світла, так що, проходячи повз променевий пучок світла, детектор може підібрати, скільки світла поглинається. Детектор також записує час утримання компонентів, виходячи з порядку, в якому вони виходять зі стовпця. Даний вихід може бути проаналізований на основі площі піку для визначення точної природи компонентів зразків.