Зміст
- Серійні розводи
- Підготовка табличок для обчислення титру
- Підрахунок та обчислення титру вірусу
- Попередження
Обчислення титру для вірусу - це складний спосіб сказати, що вчений підраховує кількість вірусів у певній вибірці. Для підрахунку титру вірусів вчені заражають пластини зростаючих бактерій вірусними розчинами в різній концентрації та з'ясовують кількість вірусів у вихідному розчині, підраховуючи бактерії, які загинули через вірусну інфекцію.
Серійні розводи
Одягніть рукавички, наповніть 10 бульб культурою 9 мл бульйону і позначайте їх "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3" тощо тощо до "10 ^ -10". Ці пробірки буде використовуватися для вірусних серійних розведень, що використовуються для обчислення титру фагів. Оскільки віруси можуть виростати до неймовірно високих концентрацій, вам потрібно розбавити їх, щоб ефективно їх підрахувати. Кожна пробірка являє собою десятикратне розведення вірусу.
Візьміть 1 мл культури вірусу, для якої потрібно обчислити титр фагів і перенесіть його в пробірку під назвою «10 ^ -1» піпеткою. Пробірку добре перемішайте. Це ваше перше десятикратне розведення.
Візьміть 1 мл змішаної культури з пробірки з написом "10 ^ -1" і перекладіть її новою піпеткою в наступну пробірку з написом "10 ^ -2". Також змішайте цю пробірку.
Продовжуйте цю схему, щоб створити серійну серію розведення. Ви отримаєте 9 пробірок по 9 мл і 1 пробірку по 10 мл. Вірусні навантаження у ваших пробірках будуть розведені десь від 10 разів (ваша перша пробірка) або 100 разів (друга ваша пробірка) до десяти мільярдів разів (остаточна пробірка).
Підготовка табличок для обчислення титру
Візьміть 10 пробірок триптонного м'якого агару та 10 чашок Петрі та позначте їх, щоб вони відповідали вашим серійним пробіркам для розведення.
Розкрийте кришки, щоб вони не спливали на спеці, а потім помістіть пробірки з агаром у склянку з окропом. Це розплавить агар, так що ви зможете розлити його в чашки Петрі.
Перенесіть тюбики на гарячу водяну баню при температурі не менше 45 градусів Цельсія. Це забезпечить, щоб ваш агар не затвердів у пробірках, перш ніж ви зможете перелити його у чашку Петрі.
Додайте у свій агар дві краплі бактеріальної культури і обережно перемішайте. Це бактерії, які будуть вбиті, дозволяючи порахувати кількість вірусних частинок у конкретному розчині.
Додайте по 1 мл кожного серійного розведення у відповідну пробірку з агаром, поки пробірки ще знаходяться на гарячій водяній бані. Наприклад, 1 мл вашого серійного розведення 10 ^ -1 має потрапити в пробірку з агаром із написом "10 ^ -1".
Змішайте кожну пробірку і потім налийте кожну пробірку в тарілку Петрі з відповідною етикеткою. Це створить тонкий шар агару, який був прищеплений бактеріями та вірусами в кожній тарілці. Дайте пластинам рости протягом ночі в інкубаторі.
Підрахунок та обчислення титру вірусу
Вийміть свої тарілки з інкубатора і огляньте їх. Ви повинні побачити похмурі ділянки по всій тарілці, де виросли бактерії, за винятком невеликих чітких плям під назвою бляшки. Ці бляшки є пластирами мертвих бактерій, і кожен наліт являє собою один вірус.
Знайдіть тарілку, яка містить від 30 до 300 бляшок і порахуйте точну кількість бляшок на цій тарілці.
Візьміть кількість бляшок на своїй тарілці і помножте на 10. Якби ви порахували 157 бляшок, ви отримаєте 1570.
Помножте число, яке ви отримали на попередньому кроці, на обернене число на пробірці для розведення. Наприклад, якщо обрана вами тарілка була плитою 10 ^ -5, ви б помножили 1570 на 10 ^ 5, щоб отримати 157000000. Це підсумкове число - ваш титр фагів і являє собою кількість вірусів на мл вашої вихідної культури.